362 Moodi 1/2015 Keftaroliinin MIC-arvojen määritys MRSA-kannoilla TONI AHLQVIST JA KAROLIINA MYKKÄNEN Savonia-ammattikorkeakoulusta valmistuneet bioanalyytikot MRSA:N ELI METISILLIINILLERESISTENTIN Staphylococcus aureus -bakteerin kyky vastustaa kefalosporiineja on maailmanlaajuinen ongelma. Uudet viidennen sukupolven kefalosporiinien johdannaiset, kuten keftaroliini, ovat osoittaneet merkittävää tehoa in vitro -tutkimuksissa. Suomessa esiintyvillä MRSA-kannoilla keftaroliinin tehoa ei ole osoitettu vielä laajamittaisilla tutkimuksilla. Penisilliini-antibioottia käytettiin ensimmäisen kerran Yhdysvalloissa vuonna 1942 (1), ja sillä huomattiin olevan merkittävä teho grampositiivista Staphylococcus aureus:ta vastaan. Antibioottien käyttö loi bakteerille tarpeen muuntautua resistentimmäksi muuttamalla antibioottien toimintaa estäviä pintaproteiinejaan. (2) Erityisen suuri ongelma joillakin S.aureus -kannoilla on PBP2a (penicillin binding protein) -pintaproteiini, jota koodaa bakteereiden hankittu mecA -geeni. Tälläisiä kantoja kutsutaan nimellä meticillin resistant S.aureus (MRSA). PBP2a-rakenne estää kefalosporiineihin kuuluvien antibioottien kiinnittymistä bakteeriseinämään, jolloin antibiootti menettää tehonsa. (3) Lääketeollisuus pyrkii vastaamaan yhä vastustuskykyisemmiksi muuttuviin kantoihin uusilla mikrobilääkkeillä. Uusimpia kefalosporiinien johdonnaisia, joilla on hyvä affiniteetti PBP2a-proteiineihin, ovat muun muassa viidennen sukupolven kefalosporiinit. Eräs sellainen lääke on kauppanimeltään Zinforo® tai Teflaro® (vaikuttava-aine keftaroliini, valmistaja AstraZeneca AB). (4) Lääkeaineen tarkkoja kulutustietoja ei tällä hetkellä ole saatavilla. KEFTAROLIINI ON viidennen sukupolven laajakirjoinen kefalosporiini, jolla on erityisen suuri affiniteetti PBP2a:ta vastaan. Tämä geeni on ominainen MRSA-bakteereille. Keftaroliini kykenee näin estämään MRSA-bakteerin solukalvon synteesin, jolloin bakteerin kasvu estyy. Kyky sitoutua tähän MRSA:lle ominaiseen proteiiniin erottaa keftaroliinin edellisen polven kefalosporiineista. Keftaroliinin aihiolääke on keftaroliini fosamiili, joka muuttuu aktiiviseksi keftaroliiniksi plasman fosfataasientsyymien vaikutuksesta. (5) EUCAST (European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing) on eurooppalainen mikrobilääkeherkkyyttä käsittelevä elin, joka toteuttaa muun muassa herkkyysrajojen asettamista. EUCAST:in herkkyystilastojen avulla MIC (Minimal Inhibitory Concentration) -tuloksia on mahdollista vertailla keskenään. In vitro -tutkimuksissa EUCAST on määrittänyt keftaroliinin MIC-raja-arvoiksi MRSA:lle ≤ 1μg/ml. (6) Toistaiseksi kyseisen antibiootin tehoa ei ole testattu laajamittaisesti Suomessa esiintyvillä MRSA-kannoilla. TEIMME TUTKIMUKSEN, jonka otoksena oli 40 MRSA karakterisoitua kantaa, jotka säilytettiin syväjäässä (-80 °C) Islabin Mikkelin aluelaboratorion kliinisen mikrobiologian laboratoriossa. Kannat oli varmistettu mecA -geeni positiivisiksi, spa-tyypitetty ja niiden herkkyysprofiili mukaan lukien herkkyys oksasilliinille (E-testiliuskat, BioMériux) oli tutkittu kliinisen laboratorion toimesta. Yhden vuorokauden ikäisistä bakteerikannoista tehtiin 0,5 McFarland-standardin mukainen suspensio, joka levitettiin dreijaamalla tasaisesti Müller Hinton -maljoille. E-testiliuskat (BioMériux) asetettiin steriilisti maljoille ja inkuboitiin +35°C lämpökaapissa yön yli. Tulokset luettiin seuraavana päivänä. TULOKSENA OLI, että 40 kannan MIC-arvot olivat kaikilla kannoilla hyvin yhteneväiset, sekä kasvualueen reunat olivat hyvin tarkkarajaiset (Taulukko 1.). MIC-arvojen keskiarvo +/- keskihajonta on 0,56 μg/ml, +/- 0,15; mediaani 0,5 ja vaihteluväli: min 0,25 μg/ml max 1 μg/ml. Tulokset olivat riippumattomia spa-tyypistä ja oksasilliini MIC-arvoista. Tutkimus vahvisti oletusarvoja keftaroliinin in vitro -tehokkuudesta. Lääkeaineelle tuli tuloksena matalat ja yhteneväiset MIC-arvot. Tämän tutkimuksen perusteella suosittelemme keftaroliini E-testin käyttöönottoa laboratoriodiagnostiikkaan MRSA-kantoja tutkittaessa. E-testiliuskat ovat nopeita lisätä herkkyysmaljoille sekä tulokset on helppo lukea muun rutiinityön ohella. LÄHTEET: 1. Charles M, Grossman MD. The first use of penicillin in the United States. Annals of Internal Medicine. 135-136. 2008. http://web.a.ebscohost. com/ehost/pdfviewer/ pdfviewer?vid=7&sid=8342ece2 ed4f-4908-b12e-33b989a2c- 0df%40sessionmgr4002&hid=4101 2. Reygaerd. W. Focus: methicillin-resistant Staphylococus sic aureus (MRSA). Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA): molecular aspects of antimicrobial resistance and virulence. Clinical laboratory science. 111-114, 2009. http://web.a.ebscohost.com/ ehost/pdfviewer/pdfviewer?sid=b- 4da7c07-393b-4f15-aa36-136dea61 a3cb%40sessionmgr4003&vid=1&- hid=4214. 3. Fuda C, Suvorov M, Vakulenko S.B, Mobashery S. The Basis for Resistance to δ-Lactam Antibiotics by Penicillin-binding Protein 2a of Methicillin resistant Staphylococcus aureus. Departmen of Chemistry and Biochemistry, Uiversity of Notre Dame. 2004. http://www.jbc. org/content/279/39/40802.long 4. European medicines agency. Valmisteyhteenveto keftaroliini. AstraZeneca AB. 6-8, 2013. http:// ec.europa.eu/health/documents/ community-register/ 2012/20120823123835/ anx_123835_fi.pdf. 5. Saravolatz L, Stein G, Johnson L. Ceftaroline: A Novel Cephalosporin with Activity against Methicillin resistant Staphylococcus aureus. Clinical Infectious Diseases. 1156-1163, 2011. Saatavissa: http://cid.oxfordjournals. org/content/52/9/1156. full.pdf+html?sid=c- 2f22a20-db52-4e36-9bfc-db74cbf56aa7 6. European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing. EUCAST. 2013 http://www.eucast. org/ Karoliina Mykkänen.
Moodi | 1/2015
To see the actual publication please follow the link above